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谷丙轉氨酶（ALT）在37℃及PH7.4條件下，作用于丙氨酸及α-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應30min后（固定時間）加入2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中止反應，同時DNPH與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于505nm比讀吸光度并計算酶活力。